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【導(dǎo)讀】作為微孔板比色計(jì)的酶標(biāo)儀，其基本功能不外乎一個(gè)比色測(cè)定，所不同的是在測(cè)定波長(zhǎng)范圍、吸光度范圍、光學(xué)系統(tǒng)、檢測(cè)速度、震板功能、溫度控制、定性和定量測(cè)定軟件

    作為微孔板比色計(jì)的酶標(biāo)儀，其基本功能不外乎一個(gè)比色測(cè)定，所不同的是在測(cè)定波長(zhǎng)范圍、吸光度范圍、光學(xué)系統(tǒng)、檢測(cè)速度、震板功能、溫度控制、定性和定量測(cè)定軟件功能等方面的差異，當(dāng)然全自動(dòng)酶免疫分析系統(tǒng)還具有自動(dòng)洗板、溫育、加樣等功能。在臨床實(shí)驗(yàn)室實(shí)際工作中，實(shí)驗(yàn)人員在使用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定操作時(shí)，有時(shí)難免會(huì)對(duì)酶標(biāo)儀的一些性能指標(biāo)產(chǎn)生迷惑，甚至對(duì)酶標(biāo)儀的應(yīng)用產(chǎn)生錯(cuò)誤的理解。如諸如使用酶標(biāo)儀較用肉眼觀察測(cè)定的陽(yáng)性率明顯增加這樣的問(wèn)題。

    一、測(cè)定波長(zhǎng)目前國(guó)內(nèi)常見(jiàn)的ELISA試劑盒所使用的標(biāo)記用酶均為辣根過(guò)氧化物酶(HRP)，底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)，其在過(guò)氧化氫溶液的存在下，經(jīng)HRP作用，分別氧化為2,2,-二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時(shí)，DAB在450nm波長(zhǎng)處有最大吸收，當(dāng)pH值降為L(zhǎng)0時(shí)，最大吸收波長(zhǎng)移至492nm,同時(shí)摩爾消光系數(shù)變大，顯色加深，因而常用強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長(zhǎng)450nm處有最大消光系數(shù)，如果HRP量少，H:O:和TMB過(guò)量時(shí)，則形成藍(lán)色的陽(yáng)離子根。降低pH,即可使藍(lán)色的陽(yáng)離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌，使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min.因此，450nm和492nm兩個(gè)波長(zhǎng)是目前ELISA測(cè)定最常用的。各種酶標(biāo)儀都配有放置濾光片的可自動(dòng)轉(zhuǎn)換的部件，可以同時(shí)安裝6~8片濾光片，所配備的濾光片均應(yīng)包括上述兩個(gè)波長(zhǎng)，有的酶標(biāo)儀以490nm濾光片替代492nm濾光片，影響不大一般酶標(biāo)儀的測(cè)定波長(zhǎng)在400~750nm或800nm之間，完全可以滿足ELISA的顯色測(cè)定。。除了這兩個(gè)基本濾光片外，考慮到雙波長(zhǎng)比色的需要，還應(yīng)有620nm或630nm或650nm和405nm波長(zhǎng)的濾光片，其他濾光片可根據(jù)自己的需要選擇。有時(shí)，有的實(shí)驗(yàn)室希望用酶標(biāo)儀作微量生化測(cè)定，故酶標(biāo)儀生產(chǎn)廠家對(duì)其生產(chǎn)的酶標(biāo)儀擴(kuò)展了紫外檢測(cè)功能，此時(shí)需要一個(gè)340nm波長(zhǎng)濾光片。此時(shí)，酶標(biāo)儀的測(cè)定波長(zhǎng)范圍就成為340-750nm或800nm。酶標(biāo)儀有單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)檢測(cè)功能有時(shí)使用者不知在什么情況下使用單或雙波長(zhǎng)檢測(cè)。所謂的“單波長(zhǎng)”就是使用一種對(duì)顯色具最大吸收的波長(zhǎng)即450nm或492nm進(jìn)行比色測(cè)定；而“雙波長(zhǎng)”則除了用對(duì)顯色具最大吸收的波長(zhǎng)即450nm或492nm進(jìn)行比色測(cè)定外，同時(shí)用對(duì)特異顯色不敏感的波長(zhǎng)如630nm進(jìn)行測(cè)定，酶標(biāo)儀最后打印出來(lái)的吸光度則為二者之差。630nm波長(zhǎng)下得到的吸光度是非特異的，來(lái)自于板子上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此，在ELISA比色測(cè)定中，最好使用雙波長(zhǎng)，且不必設(shè)空白孔。

    二、測(cè)定的吸光度范圍通常，酶標(biāo)儀的吸光度測(cè)定范圍在。0-2.5之間即可以滿足ELISA的測(cè)定要求。早期的酶標(biāo)儀可測(cè)定的吸光度一般在0-2.5之間，但現(xiàn)在基本上都做了拓寬，可達(dá)到3.5以上，并且能保持很好的精密度與線性。如Labsystems公司DragonWellscanMK-2的吸光度測(cè)定范圍為0-3.5，而MultiskanAscent的吸光度測(cè)定范圍(Abs)達(dá)0-4.0，在0-4.0范圍，線性誤差不超過(guò)±2.0%，在0.3-3.0吸光度范圍內(nèi)，測(cè)定精密度CV小于±0.2%；3.0-4.0Abs范圍內(nèi)，測(cè)定精密度CV小于士0.2%。因此，對(duì)于酶標(biāo)儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍，主要要看在一定的吸光度范圍內(nèi)的線性和精密度如何。

    三、光學(xué)系統(tǒng)酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道，亦有單通道)檢測(cè)，一般為硅光管或光導(dǎo)纖維，除測(cè)定通道外，有的酶標(biāo)儀還有一個(gè)參比通道，每次測(cè)定可進(jìn)行自我校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何，均可通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定的吸光度范圍、線性度、精密度和準(zhǔn)確度等體現(xiàn)出來(lái)。光學(xué)系統(tǒng)好的話，則上述指標(biāo)也應(yīng)較佳。測(cè)定的精密度與測(cè)定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。

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相關(guān)熱詞：

等離子清洗機(jī),反應(yīng)釜,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,高精度溫濕度計(jì),露點(diǎn)儀,高效液相色譜儀價(jià)格,霉菌試驗(yàn)箱,跌落試驗(yàn)臺(tái),離子色譜儀價(jià)格,噪聲計(jì),高壓滅菌器,集菌儀,接地電阻測(cè)試儀型號(hào),柱溫箱,旋渦混合儀,電熱套,場(chǎng)強(qiáng)儀萬(wàn)能材料試驗(yàn)機(jī)價(jià)格,洗瓶機(jī),勻漿機(jī),耐候試驗(yàn)箱,熔融指數(shù)儀,透射電子顯微鏡。

【導(dǎo)讀】適用： 利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法用于食品及飼料中三聚氰胺的定量測(cè)定。 檢測(cè)原理： 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法定量測(cè)定三聚氰胺殘留。利用萃取液通過(guò)均質(zhì)及振蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺進(jìn)行免疫測(cè)定。先將三聚氰胺酶

適用：

利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法用于食品及飼料中三聚氰胺的定量測(cè)定。

檢測(cè)原理：

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法定量測(cè)定三聚氰胺殘留。利用萃取液通過(guò)均質(zhì)及振蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺進(jìn)行免疫測(cè)定。先將三聚氰胺酶標(biāo)記物，樣品萃取物及標(biāo)準(zhǔn)加入到已經(jīng)包被有三聚氰胺抗體的微孔中開(kāi)始反應(yīng)。在30分鐘的孵育過(guò)程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合微孔中的三聚氰胺抗體，孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒(méi)有結(jié)合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標(biāo)記物。再用去離子水清洗結(jié)束后，每孔中加入清澈的底物溶液，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無(wú)色的底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的物質(zhì)。孵育30分鐘后停止此反應(yīng)，根據(jù)各孔顏色深淺進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值。

設(shè)備及材料：

1、具有450nm的酶標(biāo)分析儀

2、8頭或12頭洗板機(jī)(選配)

3、三聚氰胺檢測(cè)試劑盒

4、可吸取50ul的移液器及吸頭及.吸水紙

5、蒸餾水或去離子水

6、 20mM PBS： 0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸餾水定容至1000ml.

7、清洗液：0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸餾水定容至1000ml.+0.5ml 土溫20樣品

飼料前處理：(稀釋倍數(shù)：20)

1、稱(chēng)1g飼料樣品，加入4ml甲醇；

2、震蕩1min，加入0.1g氯化鈉；

3、4000轉(zhuǎn)離心5min；

4、取上清液0.2ml加入到0.8ml 20mMPBS中，混勻。

5、取150ul測(cè)定。

檢測(cè)：

1、先將三聚氰胺酶標(biāo)記物50ul，樣品150ul及標(biāo)準(zhǔn)150ul加入到已經(jīng)包被有三聚氰胺抗體的微孔中開(kāi)始反應(yīng)。

2、在30分鐘的孵育過(guò)程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合微孔中的三聚氰胺抗體；

3、孵育30分鐘后用清洗液洗掉小孔中所有沒(méi)有結(jié)合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標(biāo)記物。清洗四次后，放在桌上用吸水紙吸掉微孔板里多余的水份；

4、清洗結(jié)束后，每孔中加入100ul清澈的底物溶液，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無(wú)色的底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的物質(zhì)。

5、孵育30分鐘后加入100ul 停止液STOP停止此反應(yīng)，根據(jù)各孔顏色深淺進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值

結(jié)果分析：

1、半定量的結(jié)果是由樣品的吸光率與標(biāo)準(zhǔn)的吸光率的簡(jiǎn)單對(duì)比而來(lái)判定：樣品的顏色比標(biāo)準(zhǔn)的顏色淺，則三聚氰胺的濃度比標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度高，樣品的顏色比標(biāo)準(zhǔn)的顏色深則三聚氰胺的濃度比標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度低。

2、定量分析需要繪制以標(biāo)準(zhǔn)樣的吸光率為X軸,以標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度的半對(duì)數(shù)為Y軸的曲線圖。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣。吸光率的點(diǎn)畫(huà)成一直線,如此樣品的光吸收率可在線上找到,與此相對(duì)應(yīng)的Y軸則為樣品的濃度,樣品光吸收率。范圍應(yīng)比標(biāo)準(zhǔn)樣的最底范圍高,比最高范圍低, 即可說(shuō)明此樣品中三聚氰胺的含量大于500ppb或小于20ppb。

特點(diǎn)：

本產(chǎn)品為酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)法，靈敏度高、檢測(cè)成本低，可適用于生產(chǎn)及檢驗(yàn)單位大批量快速篩查。

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　　酶標(biāo)儀是用于臨床檢驗(yàn)學(xué)的常見(jiàn)設(shè)備，廣泛用于臨床研究，生物學(xué)，農(nóng)業(yè)學(xué)和食品安全監(jiān)測(cè)等。中國(guó)的免疫診斷方法有三個(gè)：酶免、放免和發(fā)光。放免由于試劑污染問(wèn)題和有效期問(wèn)題已經(jīng)被市場(chǎng)淘汰，正處于衰退期，而發(fā)光的設(shè)備比較昂貴，酶免正處于成長(zhǎng)期，因此此時(shí)購(gòu)買(mǎi)酶標(biāo)儀是非常適時(shí)又正確的選擇。
　　
　　酶標(biāo)儀的日常維護(hù)和保養(yǎng)要注意些什么呢？
　　
　　1、儀器應(yīng)放置在無(wú)磁場(chǎng)和干擾電壓，低于40分貝的環(huán)境下；
　　
　　2、應(yīng)避免陽(yáng)光直射以防止設(shè)備老化；
　　
　　3、操作時(shí)環(huán)境溫度應(yīng)在15℃－40℃之間，環(huán)境濕度在15％－85％之間；
　　
　　4、運(yùn)行中操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定；
　　
　　5、操作環(huán)境空氣清潔，避免水汽，煙塵；
　　
　　6、保持干燥、干凈、水平的工作臺(tái)面，足夠大的操作空間；
　　
　　7、使用加液器加液，加液頭不能混用；
　　
　　8、盡量配套使用洗板機(jī)洗板，這樣洗的干凈，有效避免交叉污染；
　　
　　9、嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)操作，反應(yīng)時(shí)間準(zhǔn)確；
　　
　　10、在測(cè)量過(guò)程中，請(qǐng)勿碰酶標(biāo)板，以防酶標(biāo)板傳送時(shí)擠傷操作人員的手；
　　
　　11、請(qǐng)勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部，操作完成后請(qǐng)洗手；
　　
　　12、如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害，請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒的操作說(shuō)明，以防對(duì)操作人員造成損害；
　　
　　13、如果儀器接觸過(guò)污染性或傳染性物品，請(qǐng)進(jìn)行清洗和消毒；
　　
　　14、不要在測(cè)量過(guò)程中關(guān)閉電源；
　　
　　15、對(duì)于因試劑盒問(wèn)題造成的測(cè)量結(jié)果的偏差，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)修改參數(shù)，以達(dá)到zui佳效果；
　　
　　16、使用后蓋好防塵罩；
　　
　　17、出現(xiàn)技術(shù)故障時(shí)應(yīng)及時(shí)與廠家，切勿擅自拆卸酶標(biāo)儀。